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原位雜交(In situ hybridazation)
固定
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí),用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時(shí)后用50%2%多聚甲醛溶液洗,然后換成,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng),可阻斷色素的形成)
原位雜交技術(shù)在許多領(lǐng)域都有應(yīng)用,以下是其中幾個(gè)具體應(yīng)用:
細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué):在細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)常被用于研究基因的表達(dá)和定位。例如,通過(guò)標(biāo)記特定基因的探針,可以在細(xì)胞或組織中檢測(cè)特定基因序列的存在和分布,進(jìn)而了解基因在細(xì)胞分化、發(fā)育和功能中的作用。
基因組學(xué)和遺傳學(xué)研究:原位雜交技術(shù)也可用于基因組學(xué)和遺傳學(xué)研究。例如,通過(guò)標(biāo)記多個(gè)基因探針,可以檢測(cè)基因組中的多個(gè)基因序列,從而進(jìn)行基因定位、基因表達(dá)譜分析、基因突變檢測(cè)等研究。
病毒學(xué)和病原微生物研究:在病毒學(xué)和病原微生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)常被用于檢測(cè)和定位病毒、細(xì)菌等病原微生物。例如,通過(guò)標(biāo)記特異性或核酸探針,可以檢測(cè)組織中病原微生物的存在、情況以及分布特征,從而為疾病的預(yù)防、診斷和提供依據(jù)。
總之,原位雜交技術(shù)在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、基因組學(xué)、遺傳學(xué)、病毒學(xué)和病原微生物學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值,為人類認(rèn)識(shí)生命現(xiàn)象、探究疾病機(jī)制和提供了有力的技術(shù)支持。
熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過(guò)程的特異性,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號(hào)的檢測(cè)比性信號(hào)的檢測(cè)更靈敏,可以檢測(cè)出低拷貝數(shù)的DNA序列,甚至可以檢測(cè)單個(gè)基因序列。
快速簡(jiǎn)便:FISH技術(shù)操作簡(jiǎn)便,雜交過(guò)程可以在數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)完成,而且不需要過(guò)于復(fù)雜的設(shè)備,便于在實(shí)驗(yàn)室開展。