實驗原理
高架十字迷宮(the elevated plus maze,EPM)是評價嚙齒類動物焦躁反應的實驗方法 , 相較傷害性刺激所致小鼠焦躁行為檢測(如電刺激 、 噪聲刺激 、 飲食剝奪和暴露在捕食者氣味等), 該實驗具有操作簡單的優點 , 能直觀反映小鼠的條件應答 。 EPM實驗是在高架Y型迷宮的基礎上發展而來的 。 EPM由開臂(open arms和閉臂(closed arms)各兩條組成 , 呈十字形交叉 , 交義部分為中央區 , 距地面有一定高度 。其原理是由于面對新事物開臂 小鼠會產生好奇心去探究 , 而它們有嗜暗的天性(閉臂), 兩者之間發生探究與回避的沖突行為,產生焦躁心理。整個迷宮距離地面的高度相當于人類站在懸崖邊,易導致動物產生恐懼不安的心理。可以通過對比小鼠在開臂和閉臂內的滯留時間和路程來評價小鼠的焦躁行為。
EPM實驗在藥品開發和研究中得到廣泛的應用:主要用于苯二氮卓類藥品的抗焦躁作用研究 及篩選具有抗焦l慮作用的新藥,也被用于研究精神性藥品濫用的影響及激s素的功能,應激對生殖、衰老、妊s娠的影響等。抗焦l慮藥主要選擇性地抑制邊緣系統 的海馬、杏仁核 ,產生抗焦躁作用。
ROS也就是活性氧(reactive oxygen species,ROS)指來源于氧的自由基和非自由基。ROS在細胞生命,應激和si亡中具介導作用,并且不同濃度的ROS在其中起著截然不同的作用,從而導致細胞命運的不同。因此對ROS的濃度或相對水平進行可靠的測量非常有必要。
實驗儀器和材料
細胞培養基
胎牛xue清
青mei素/鏈mei素
胰酶
PBS
DMSO
活性氧(ROS)試劑盒
血球計數板
CO2培養箱
倒置熒光顯微鏡
實驗步驟1、細胞傳代培養:當細胞長至80-90%時,去除培養基,加入PBS洗1-2次,去除PBS后,加入1ml胰酶消化1-3min后,加入3ml完全培養基中和胰酶終止消化,將消化的細胞轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min。倒掉上清后,加入3ml培養基重懸細胞,1:3傳代至培養皿中培養。
2、將長到培養皿80%-90%的內皮細胞用胰酶消化下來,1000rpm離心,去除上清,加入完全培養基重懸細胞,將細胞分別種在6孔板中,每孔種1×106個細胞。3、待細胞貼壁后,使用不同的含藥xue清的培養基培養細胞。3、待細胞貼壁后,使用不同的含藥xue清的培養基培養細胞。4、48h后,加入DCFH-DA于培養基中,稀釋倍數為1:1000。5、孵育1h后,直接將細胞置于熒光顯微鏡下拍照。
實驗結果